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| lncRNA MEG3靶向miR-130a-5p调控人视网膜色素上皮细胞损伤的研究 |
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| 投稿时间：2023-03-22 |
| DOI：10.3969/j.issn.1000-0399.2023.11.006 |
| 中文关键词: lncRNA MEG3 miR-130a-5p 年龄相关性黄斑变性 人视网膜色素上皮细胞 氧化应激 炎症反应 |
| 英文关键词: |
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| 中文摘要: |
| 目的 探讨lncRNA MEG3在年龄相关性黄斑变性（AMD）患者中的表达及其靶向miR-130a-5p对人视网膜色素上皮（RPE）细胞损伤的影响。方法 选取2020年6月至2021年8月永州职业技术学院附属医院收治的AMD患者38例以及同期的健康体检者38例，收集其空腹静脉血，qRT-PCR检测其血清lncRNA MEG3表达水平。不同浓度（0μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L）过氧化氢（H2O2）处理人RPE细胞系ARPE-19细胞构建RPE细胞损伤模型，并检测lncRNA MEG3在H2O2处理的ARPE-19细胞中表达。双荧光素酶报告基因实验和RNA结合蛋白免疫沉淀（RIP）实验分析lncRNA MEG3与miR-130a-5p的靶向关系。ARPE-19细胞分为对照组（常规培养，不进行任何特殊处理）、H2O2组（200μmol/L H2O2处理24 h）、Vector组（转染pcDNA3.1-NC24 h后200μmol/L H2O2处理24 h）、lncRNA MEG3组（转染pcDNA3.1-lncRNA MEG3 24 h后200μmol/L H2O2处理24 h）、lncRNA MEG3+miR-NC组（共转染pcDNA3.1-lncRNA MEG3和miR-NC 24 h后200μmol/L H2O2处理24 h）、lncRNA MEG3+miR-130a-5p组（共转染pcDNA3.1-lncRNA MEG3和miR-130a-5p mimics 24 h后200μmol/L H2O2处理24 h），qRT-PCR检测各组细胞中lncRNA MEG3、miR-130a-5p表达水平，噻唑蓝（MTT）法检测各组细胞活性，流式细胞仪检测各组细胞凋亡，2，7-二氯二氢代荧光黄二醋酸（DCFH-DA）荧光探针法、硫代巴比妥酸（TBA）法、水溶性四唑盐1（WST-1）法分别检测各组细胞内活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）水平，ELISA法检测各组细胞上清液中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、β-淀粉样蛋白（Aβ）水平，Western blot检测各组细胞中核因子E2相关因子2（Nrf2）/血红素氧合酶1（HO-1）通路相关蛋白表达。结果 与健康体检者比较，lncRNA MEG3在AMD患者血清中呈低表达（P<0.05）。与0μmol/L H2O2处理组比较，100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L、600μmol/L H2O2处理ARPE-19细胞均可降低细胞存活率以及下调细胞中lncRNA MEG3表达水平（P<0.05）。双荧光素酶报告基因实验和RIP实验证实lncRNA MEG3与miR-130a-5p存在靶向关系。过表达lncRNA MEG3通过下调miR-130a-5p表达提供了H2O2诱导的ARPE-19细胞存活率、SOD水平及Nrf2、HO-1蛋白表达水平，降低了细胞凋亡率及ROS、MDA、IL-6、TNF-α、Aβ水平（P<0.05）。结论 lncRNA MEG3在AMD患者血清中呈低表达，上调lncRNA MEG3可靶向负调控miR-130a-5p表达，激活Nrf2/HO-1通路，减轻人RPE细胞氧化应激和炎症反应，保护细胞免受损伤。 |
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